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市场活动

Oligo dT磁珠:多功能核酸捕获工

应用场景一:mRNA纯化

 

mRNA是一类携带遗传信息且能指导蛋白质合成的单链核糖核酸,满足合成各种蛋白质的所有遗传信息的要求。许多研究发现,mRNA可作为许多疾病诊断的工具,包括肿瘤、胃肠道疾病、心血管疾病、关节炎、中枢神经系统疾病等。

 

mRNA序列由5个关键结构元件组成:5'帽结构(Cap)、5'非翻译区(UTR)、编码区(CDS)、3'非翻译区(UTR)和poly(A)尾巴。(图1)

  

图1.mRNA结构示意图

 

Oligo dT磁珠是最常用的mRNA捕获载体之一,其表面的oligo dT与真核生物mRNA的poly A尾互补配对,能够快速高效地从总RNA、细胞裂解物或带有poly A尾的体外转录RNA样本中分离纯化mRNA,下游应用于PCR检测和建库测序。

 

图2.mRNA的qPCR或建库测序检测流程图

 

 

应用场景二:核酸探针捕获

 

Oligo dT磁珠的另一类广泛应用,即固定poly(A)标记的核酸探针,进行目标序列核酸捕获,下游应用于qPCR检测。

图3.目标核酸的qPCR检测流程图

 

核酸探针和磁珠固定的方法有共价、亲和作用、碱基互补配对、离子或偶极作用等方式,根据用于场景不同各有优缺点。目前也有一些分子诊断试剂开发企业选择oligo dT磁珠作为核酸探针固定的载体。

 

表1. 磁珠表面核酸探针固定的技术之间的比较


Oligo   dT-poly A

碱基互补配对系统

SA-biotin

亲和系统

共价固定系统

探针修饰

Poly A

生物素

NH2

磁珠

Oligo dT磁珠

SA磁珠

羧基磁珠

优点

技术门槛低

特异性高

稳定性好

技术门槛低

反应速度快

非特异吸附少

成本低

 

缺点

成本略高

探针需要poly A标记

成本略高

探针需要生物素标记

技术门槛高

 


一些分子诊断技术是利用oligo dT磁珠固定肽-寡核苷酸,分离纯化血清中HBV DNA。研究结果显示oligo dT磁珠的灵敏度比常规方法的灵敏度高100倍,且核酸的完整好,实验结果重复性高CV达到0.05%。

 

磁珠推荐

BeaverBeads® Oligo(dT)磁珠表面共价偶联 Oligo(dT),可高效地从真核生物总RNA或直接从动植物组织或细胞裂解物中快速分离出完整、高纯度的mRNA;也可固定poly(A)标记的核酸探针,用于目标序列核酸的捕获

分离得到的mRNA和靶标核酸可用于多种分子生物学实验:RT-PCR、固相cDNA 文库构建、RACE、Northern等。

产品特点:

a)    表面活性位点丰富,mRNA捕获效率高

b)    表面特殊封闭,非特异性吸附低

c)    超顺磁性微球,可配套自动化设备实现高通量操作

d)    工业化规模生产,批次稳定

图4.oligo dT磁珠结构示意图

 

mRNA纯化数据:

样本:人细胞Total RNA

上样量:300ng Total RNA

磁珠用量:20-50uL

实验结果:


靶标

磁珠

Mean Ct

GAPDH mRNA

进口品牌

22.56

BEAVER

22.62

18S rRNA

进口品牌

26.06

BEAVER

26.19

 

实验操作过程中,BeaverBeads Oligo (dT)磁珠的悬浮性与进口品牌相当。从人细胞total RNA样本中纯化mRNA,采用荧光定量PCR对样本进行定量检测,对mRNA(特异性)和sRNA(非特异性)检测的Ct值偏差<0.1,两品牌磁珠无明显差异。

 



产品名称

货号

规格

载量

应用给推荐

BeaverBeads® Oligo(dT)

70431

1μm,5mg/mL

>2μg mRNA/mg磁珠

mRNA捕获、mRNA疫苗加尾分布检测

核酸探针捕获

 

 

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