BeaverBeads™ His-tag Protein Purification用于免疫印迹或考马斯蓝染色分析
该研究将细菌表达的His标记的TMED2截短体（His-TMED2）与BeaverBeads™ His偶联，然后与表达F-MITA截短体的HEK293细胞提取物一起孵育。通过用SDS上样缓冲液煮沸洗脱与磁珠结合的蛋白质，并进行了免疫印迹或考马斯蓝染色分析。
武汉大学刘昱教授等在出版于Cell Reports 8.032的通过加强MITA二聚化和促进TMED2贩运，增强细胞IFN对DNA病毒的反应中总结：
由于MITA在天然免疫识别胞质异常DNA的信号通路中的重要作用，其表达和活化的调控机制一直是研究热点。该研究发现，TMED2通过增强MITA的二聚化、促进MITA从核糖体向ER上的转位、促进MITA从ER向核周小泡的转运，从而增强抗DNA病毒天然免疫反应。
该研究将细菌表达的His标记的TMED2截短体（His-TMED2）与BeaverBeadsTM His偶联，然后与表达F-MITA截短体的HEK293细胞提取物一起孵育。通过用SDS上样缓冲液煮沸洗脱与磁珠结合的蛋白质，并进行了免疫印迹或考马斯蓝染色分析。
研究人员发现敲低或敲除TMED2明显抑制HSV-1感染诱导的MITA二聚化以及转录因子IRF3和NF-κB的活化，降低I型干扰素和炎症因子的相关基因转录；在TMED2敲除的细胞中HSV-1复制也明显增加，表明TMED2促进抗DNA病毒天然免疫信号通路。进一步的研究发现HSV-1感染诱导内源性TMED2与MITA在ER腔内发生相互作用。TMED2通过增强MITA与转位复合体关键成分TRAPβ的相互作用，促进MITA翻译后从核糖体向ER转位；TMED2也通过强化MITA与COPII复合物成分Sec24C的相互作用，促进MITA经COPII复合物组装，由ER向高尔基体转运。
该论文发现了MITA信号通路的新调控分子TMED2，并解析了其作用机制，为构建天然免疫信号转导调控网络提供重要支持，也为筛选抗病毒药物的分子靶点提供线索。
图 免疫印迹及考马斯蓝染色分析
