BeaverBeads® IDA-Nickel用于研究促进结直肠癌转移的自噬相关蛋白ATG9B
2020.10.6 南方医科深圳医院病理学系李祖国教授研究团队在Cell Death & Differentiation 杂志上发表研究论文《MYH9-dependent polarization of ATG9B promotes colorectal cancer metastasis by accelerating focal adhesion assembly》。研究了ATG9B蛋白在结直肠癌(colorectal cancer，CRC)转移中的作用，及寻找CRC转移的潜在诊断标志物和治疗靶点。
结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是常见的消化道肿瘤之一，由于早期临床症状不明显，发现时常常是中晚期。自噬是一种进化保守的正常细胞中监视机制，它通过清除分解受损的细胞器和聚集的蛋白质，并将产生的基础营养物质重新利用。在结直肠癌中，自噬对肿瘤的促进与抑制双重作用广泛得到认可，因此，明确自噬对结直肠癌肿瘤细胞的作用，将为结直肠癌的治疗提供更多的理论依据。
论文解析
2020.10.6 南方医科深圳医院病理学系李祖国教授研究团队在Cell Death & Differentiation (IF15.828）杂志上发表研究论文《MYH9-dependent polarization of ATG9B promotes colorectal cancer metastasis by accelerating focal adhesion assembly》。研究了ATG9B蛋白在结直肠癌(colorectal cancer，CRC)转移中的作用，及寻找CRC转移的潜在诊断标志物和治疗靶点。
本研究通过免疫组化、qRT-PCR、细胞侵袭和黏附实验、His pulldown、IP和WB、IF、流式细胞术等实验方法，确定自噬相关蛋白9B (autophagy-related protein 9B, ATG9B)是CRC转移的关键潜在靶基因，发现MYH9是ATG9B关键的相互作用蛋白，ATG9B和MYH9的结合通过降低它们与E3泛素连接酶的结合来增强彼此的稳定性。在CRC细胞侵袭过程中，ATG9B在MYH9的辅助下被运送到细胞边缘，通过介导内吞整合素β1和Talin-1的相互作用，加速局灶性黏附(FA)的组装，促进整合素β1的活化。总之，本研究强调了ATG9B在CRC转移中促进黏附灶聚集的重要作用。ATG9B和MYH9可以为预防CRC进展提供一对潜在的治疗靶点。
在此研究过程中，利用BeaverBeads®IDA-Nickel（Cat# 70501）纯化细菌表达His标记的ATG9B-Cd2蛋白(氨基酸298-438 (aa298-438))，然后将ATG9B-Cd2His蛋白加入转染MYH9-Flag293T细胞的裂解液中，通过pull-down实验，利用anti-his磁珠拉出相互作用的两个蛋白，进行western blot检测ATG9B和MYH9相互作用(如下图）：
Fig. 1 MYH9 interacts with ATG9B directly.
A. LoVo and SW620 cells were lysed and subjected to immunoprecipitation with anti-ATG9B antibody or rabbit IgG using silver staining. The red boxes represents the detected bands.
B. Endogenous ATG9B and MYH9 were immunoprecipitated in SW620 cells.
C. Exogenous ATG9BHis and MYH9Flag were immunoprecipitated in 293T cells.
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