
小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒(阳选)
¥3470.00
阳选法试剂盒是利用纳米磁珠标记和富集目的细胞,再用释放剂将磁珠从细胞表面解离,从而得到无磁珠标记的目标细胞。
- 产品货号:70904-100
- 产品单位:盒
- 产品说明:for 1*10^9 cells
产品特点
• 纯度达到95%以上
• 样本适用性广,可直接捕获目的细胞
• 磁珠释放技术细胞无磁珠标记
产品信息
应用案例
图1 BeaverBeads® 小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒(阳选法)分选小鼠脾脏细胞,流式细胞仪分析图
利用BeaverBeads® 小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒(阳选法)从BALB/c小鼠脾脏细胞中分选CD4+细胞,用PE anti-mouse CD4抗体(克隆号RM4-4)标记后进行流式细胞仪分析。
结论:分选前后的CD4+细胞纯度分别为13.3%和97.2% 。
与美天旎对比如何?
相同点:均能实现高纯度、高活性的细胞分选。
不同点:美天旎磁珠因磁珠粒径小,磁性弱,需要搭配分选柱进行磁性的放大才能实现细胞分离,操作时长约30-60分钟(分选柱需预冲洗、上样、洗涤等步骤)。海狸细胞分选试剂盒不需要分选柱,仅需磁力架搭配流式管,最快15分钟(阴选法)即可分离细胞。
普通的磁力架可以用于细胞分选吗?
用于细胞分选磁力架的磁场强度要>7000Gs,否则会影响细胞分选效果。
推荐海狸细胞分选磁力架(Cat.No: 60205,60205Ⅱ,60206)。
分选T细胞,样本处理时要活化吗(加刀豆蛋白活化)?
我们未对激活处理后的脾脏或淋巴细胞进行T细胞分选验证。
从理论上讲,阴选方式由于不直接结合目标细胞,通常不受激活处理影响;而阳性选择则可能受到一定影响,尤其是在T细胞激活后某些表面标志物表达发生变化的情况下,可能存在洗脱效率降低的风险。
建议客户在完成细胞分选后再进行激活处理,可以确保分选效果和细胞状态的稳定性。
一个试剂盒可以分选几个小鼠脾脏?
正常情况下,一个脾脏大概的细胞数量是5x10*7-1x10*8。
但细胞数量与鼠龄、小鼠品系还有单细胞悬液制备都有关系.
试剂盒里的biotin antibody mix,有没有封闭Fc受体(FcR)?
没有封闭Fc受体
可以分选出原代细胞吗?
可以,海狸的细胞分选试剂盒,从组织或者其他样本里分选出来的都是原代细胞。
细胞圈门的时候是把所有的细胞都圈入的吗?
圈所有染上色的细胞,(要看染的部位,细胞碎片、死细胞染不上)。
E1左下角细胞碎片不要圈,P1圈对角线(单个核细胞)
散点图在流式上比较分散的原因?
可能是磁吸不充分导致的,可以延长磁吸时间或更换磁性更强的磁力架(>7000Gs)。
做细胞分选用哪款磁珠?
我们自己用的300 nm的SA(Cat. No. 22308C)做细胞分选,包括阳选和阴选。
目前有客户用的1μm SA(Cat. No. 22307)自己做分选,效果也很好。
细胞分选试剂盒中的磁珠洗涤步骤是否可以用磁力架吸附代替离心?
可以,使用磁性吸附洗涤比离心洗涤效果更好。
细胞分选说明书上要求4℃环境操作,是否可以在冰上操作?
可以。
分选buffer的配方是什么?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer(Cat. No. 80301)。
自己配制分选buffer时建议使用0.5 M的液体EDTA。原因:固体的EDTA比较难溶解,溶解后也可能会有肉眼看不到的颗粒,所以要过0.22μm的滤膜,但过滤膜可能会损失掉部分EDTA,所以建议用液体的。
为什么海狸的试剂盒需要裂红后再进行分选?
因为抗体mix中只有少量的红细胞抗体,防止有红细胞残留,所以需要裂红。
阴选和阳选试剂盒中抗体的区别?
阳选中只有一种抗体,即针对目的细胞的抗体;阴选中是抗体mix,含有多种针对非目标细胞的抗体。
阳选与阴选的区别
阳选法:适用样本类型多种、复杂,抗体类型单一,需要解离试剂,直接捕获,细胞没有磁珠标记,有抗体标记,操作时长最快80min,不需要分离柱。
阴选法:适用样本类型相对单一,抗体类型为多种抗体的混合物,不需要解离试剂;间接捕获,不影响细胞性能;细胞没有磁珠标记和抗体标记,操作时长最快25min,不需要分离柱。
分选buffer的配方是什么?海狸可以提供吗?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer。
细胞样品制备时需要几次过筛?具体步骤是什么?
推荐进行2次过筛。
第一次过筛:将样本置于70 μm细胞筛网筛网上进行研磨/冲洗,收集细胞。
第二次过筛:裂红完成后,使用PBS重悬细胞,将细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤。
若只进行1次过筛,残留的细胞团块可能会导致细胞/磁珠聚集,降低分选纯度。
磁珠使用前需要清洗吗?不清洗有什么影响?
磁珠使用前需要用分选buffer清洗2次(清洗方法见说明书);若不清洗,磁珠保存液中的某些组分(如抑菌剂)可能会影响细胞活性。
抗体和细胞孵育时需要注意什么?
将细胞悬液加到离心管底部,再加入Biotin-Antibody Mix,充分吹打混匀(尽量在底部进行吹打,不要溅到管壁上),4°C孵育 10 min(勿将Ep管插进冰里)。
若孵育时间不足,会使抗体与细胞无法充分结合,从而导致非目标细胞残留,影响分选纯度。
磁吸时需要注意什么?
要使用细胞分选专业磁力架,推荐(Cat. No. 60205/60206),静置5分钟,磁吸后转移大部分悬液至新管,注意不要吸到磁珠。磁吸时间过短可能会导致部分磁珠未完全吸附,分选后的细胞中有磁珠残留,且影响分选纯度。
离心条件是否有统一标准?
常规离心条件为500 g,5分钟(磁珠清洗除外,需10000 g,1分钟)。离心速度过大(超过500g)影响细胞活性。

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