小鼠中性粒细胞分选试剂盒
￥4988.00
- 产品货号:70907-100
- 产品单位:盒
- 产品说明:for 1*10^9 cells
产品特点
操作简便、快速：无需分离柱，搭配磁性分离器使用，最快30min即可完成操作；
高活性、高纯度：目的细胞无抗体和磁珠标记，且纯度高达95%。
评测数据：
1.不同细胞样本的中性粒细胞分选
使用BeaverBeads® 小鼠中性粒细胞分选试剂盒，对比分选前后目的细胞的纯度。
小鼠骨髓细胞，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度为：45.72%和95.18%。
图1.1 分选前后的细胞用PE anti-mouse CD11b（克隆号M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆号1A8）标记后进行流式细胞仪分析。
小鼠脾脏细胞，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度为：6.30%和91.84%。
图1.2 分选前后的细胞用PE anti-mouse CD11b（克隆号M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆号1A8）标记后进行流式细胞仪分析
小鼠外周血，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度分别为：20.04%和93.82%。
图1.3 分选前后的细胞用PE anti-mouse CD11b（克隆号M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆号1A8）标记后进行流式细胞仪分析
2.竞品对照
纯度分析: 分别使用BeaverBeads® 小鼠中性粒细胞分选试剂盒和进口对照试剂盒分选小鼠骨髓细胞中的中性粒细胞，对分选后的目的细胞进行纯度分析。
BEAVER试剂盒得到的CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞纯度高达93.35%，高于对照试剂盒。
图2.1 比较BEAVER与对照试剂盒分选得到的骨髓中性粒细胞的纯度
活率分析: 对分选得到的中性粒细胞进行活率分析。
BEAVER试剂盒分选得到的CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞活率高达99.85%，高于对照试剂盒。
图2.2 比较BEAVER与对照试剂盒分选得到的骨髓中性粒细胞的活率。
与美天旎对比如何？
相同点：均能实现高纯度、高活性的细胞分选。
不同点：美天旎磁珠因磁珠粒径小，磁性弱，需要搭配分选柱进行磁性的放大才能实现细胞分离，操作时长约30-60分钟（分选柱需预冲洗、上样、洗涤等步骤）。海狸细胞分选试剂盒不需要分选柱，仅需磁力架搭配流式管，最快15分钟（阴选法）即可分离细胞。
普通的磁力架可以用于细胞分选吗？
用于细胞分选磁力架的磁场强度要>7000Gs，否则会影响细胞分选效果。
推荐海狸细胞分选磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分选T细胞，样本处理时要活化吗（加刀豆蛋白活化）？
我们未对激活处理后的脾脏或淋巴细胞进行T细胞分选验证。
从理论上讲，阴选方式由于不直接结合目标细胞，通常不受激活处理影响；而阳性选择则可能受到一定影响，尤其是在T细胞激活后某些表面标志物表达发生变化的情况下，可能存在洗脱效率降低的风险。
建议客户在完成细胞分选后再进行激活处理，可以确保分选效果和细胞状态的稳定性。
一个试剂盒可以分选几个小鼠脾脏？
正常情况下，一个脾脏大概的细胞数量是5x10*7-1x10*8。
但细胞数量与鼠龄、小鼠品系还有单细胞悬液制备都有关系.
试剂盒里的biotin antibody mix，有没有封闭Fc受体（FcR）？
没有封闭Fc受体
可以分选出原代细胞吗？
可以，海狸的细胞分选试剂盒，从组织或者其他样本里分选出来的都是原代细胞。
细胞圈门的时候是把所有的细胞都圈入的吗?
圈所有染上色的细胞，（要看染的部位，细胞碎片、死细胞染不上）。
E1左下角细胞碎片不要圈，P1圈对角线（单个核细胞）
散点图在流式上比较分散的原因？
可能是磁吸不充分导致的，可以延长磁吸时间或更换磁性更强的磁力架（＞7000Gs）。
做细胞分选用哪款磁珠？
我们自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做细胞分选，包括阳选和阴选。
目前有客户用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分选，效果也很好。
细胞分选试剂盒中的磁珠洗涤步骤是否可以用磁力架吸附代替离心？
可以，使用磁性吸附洗涤比离心洗涤效果更好。
细胞分选说明书上要求4℃环境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分选buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分选buffer时建议使用0.5 M的液体EDTA。原因：固体的EDTA比较难溶解，溶解后也可能会有肉眼看不到的颗粒，所以要过0.22μm的滤膜，但过滤膜可能会损失掉部分EDTA，所以建议用液体的。
为什么海狸的试剂盒需要裂红后再进行分选？
因为抗体mix中只有少量的红细胞抗体，防止有红细胞残留，所以需要裂红。
阴选和阳选试剂盒中抗体的区别？
阳选中只有一种抗体，即针对目的细胞的抗体；阴选中是抗体mix，含有多种针对非目标细胞的抗体。
阳选与阴选的区别
阳选法：适用样本类型多种、复杂，抗体类型单一，需要解离试剂，直接捕获，细胞没有磁珠标记，有抗体标记，操作时长最快80min，不需要分离柱。
阴选法：适用样本类型相对单一，抗体类型为多种抗体的混合物，不需要解离试剂；间接捕获，不影响细胞性能；细胞没有磁珠标记和抗体标记，操作时长最快25min，不需要分离柱。
分选buffer的配方是什么？海狸可以提供吗？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer。
细胞样品制备时需要几次过筛？具体步骤是什么？
推荐进行2次过筛。
第一次过筛：将样本置于70 μm细胞筛网筛网上进行研磨/冲洗，收集细胞。
第二次过筛：裂红完成后，使用PBS重悬细胞，将细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤。
若只进行1次过筛，残留的细胞团块可能会导致细胞/磁珠聚集，降低分选纯度。
磁珠使用前需要清洗吗？不清洗有什么影响？
磁珠使用前需要用分选buffer清洗2次（清洗方法见说明书）；若不清洗，磁珠保存液中的某些组分（如抑菌剂）可能会影响细胞活性。
抗体和细胞孵育时需要注意什么？
将细胞悬液加到离心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混匀（尽量在底部进行吹打，不要溅到管壁上），4°C孵育 10 min（勿将Ep管插进冰里）。
若孵育时间不足，会使抗体与细胞无法充分结合，从而导致非目标细胞残留，影响分选纯度。
磁吸时需要注意什么？
要使用细胞分选专业磁力架，推荐（Cat. No. 60205/60206），静置5分钟，磁吸后转移大部分悬液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸时间过短可能会导致部分磁珠未完全吸附，分选后的细胞中有磁珠残留，且影响分选纯度。
离心条件是否有统一标准？
常规离心条件为500 g，5分钟（磁珠清洗除外，需10000 g，1分钟）。离心速度过大（超过500g）影响细胞活性。
分选后的中性粒细胞如何保存或使用？
分选后的细胞悬液可直接用于流式检测、细胞培养、RNA/蛋白提取等实验；若不立即使用可在4℃短期保存（≤2小时）。因小鼠中性粒细胞体外生存周期短，分选后的细胞，建议尽快安排实验。
一只小鼠可以取多少骨髓/外周血细胞？
一般情况下，股骨和胫骨大概2x10^7～5x10^7个细胞，因个人操作差异原因，有所不同。
正常小鼠1ml的外周血可以拿到 2～4 × 10^6个白细胞（若小鼠为炎症模型，白细胞数可显著升高），其中中性粒细胞占比大概为15%-25%（不同品系有所不同），可以计算一下最多能提出的中性粒细胞数。
中性粒细胞分选试剂盒的得率是多少？
得率在50%-70%都是正常的（分选前中性粒细胞占比x总的细胞数量x50%-70%）
中性粒细胞分选纯度是多少？
以下是WT小鼠骨髓细胞、脾脏细胞、外周血分选前后纯度:
小鼠骨髓细胞，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度为：45.72%和95.18%。
小鼠脾脏细胞，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度为：6.30%和91.84%。
小鼠外周血，分选前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒细胞的纯度分别为：20.04%和93.82%。
本试剂盒适用于哪些样本类型？
适用于分选小鼠骨髓、外周血或脾脏中性粒细胞，不适用于其他样本类型（如肝脏、肺组织等）。原因在于该试剂盒采用阴选法，用生物素标记抗体结合非目标细胞，再通过磁珠去除。其他样本中的非目标细胞类型可能不同，缺少对应的抗体标记，会导致分选纯度下降。
是否需要裂解红细胞？裂解时需要注意哪些事项？
可根据样本类型来决定是否需要裂解红细胞（如：小鼠骨髓细胞不裂解红细胞也可直接进行分选，但分选细胞纯度可能随红细胞占比增加有5%以内小幅度下降）；裂红时，可根据组织样本及所用裂解液的不同调整用量及时间（如：小鼠外周血样本裂解需要相对更长的时间，若一次裂解不充分，也可进行二次裂解）。
细胞、抗体、磁珠的比例是多少？
每100 μL细胞悬液（含1×10⁷个细胞）需加入2 μL Biotin-Antibody Mix 和20μL清洗过的磁珠。分选细胞数量增加时，需按比例扩大抗体和磁珠用量（详见说明书）。
细胞浓度过高或过低都会影响分选效果。细胞浓度过高时，细胞容易聚集，导致抗体和细胞结合不充分，部分非目标细胞可能无法被很好的标记，进而影响分选纯度；细胞浓度过低则会导致目标细胞得率降低。
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