人CD3/CD28 T细胞激活磁珠
￥1998.00
人CD3/CD28 T细胞激活磁珠可以简单快捷的活化及扩增 T 细胞，无需饲养层细胞（抗原递呈细胞）或抗原。磁珠为直径5 µm 的惰性超顺磁珠，大小与抗原呈递细胞相似，同时共价偶联抗 CD3 和抗 CD28 抗体。细胞培养过程中可使用重组人IL-2 刺激 T 细胞群扩增。活化或扩增后，磁珠可以通过磁力架轻松去除。
- 产品货号:70910-1000
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- 产品说明:盒
人CD3/CD28 T细胞激活磁珠可以简单快捷的活化及扩增 T 细胞，无需饲养层细胞（抗原递呈细胞）或抗原。磁珠为直径5 µm 的惰性超顺磁珠，大小与抗原呈递细胞相似，同时共价偶联抗 CD3 和抗 CD28 抗体。细胞培养过程中可使用重组人IL-2 刺激 T 细胞群扩增。活化或扩增后，磁珠可以通过磁力架轻松去除。
产品信息
浓度：1 x 108 beads/mL，产品保存在添加0.1% BSA和0.1% proclin-300的PBS中，pH 7.4。
储存条件及有效期
2-8°C保存，不可冷冻，有效期见试管标签。
适用范围
本试剂盒适用于外周血单核细胞（PBMC）或 T 细胞亚群：包括 CD3+ T 细胞、CD4+ T 细胞或 CD8+ T 细胞。
激活效果
使用人CD3/CD28 T细胞激活磁珠，刺激CD3+ T细胞24到 48小时，细胞用FITC anti-human CD69抗体（克隆号 FN50 ）和PE anti-human CD25抗体（克隆号BC96）标记， 进行流式细胞仪分析。刺激前后CD25+ CD69+ T细胞占总细 胞的比例分别为0.70% 和75.81%。
与美天旎对比如何？
相同点：均能实现高纯度、高活性的细胞分选。
不同点：美天旎磁珠因磁珠粒径小，磁性弱，需要搭配分选柱进行磁性的放大才能实现细胞分离，操作时长约30-60分钟（分选柱需预冲洗、上样、洗涤等步骤）。海狸细胞分选试剂盒不需要分选柱，仅需磁力架搭配流式管，最快15分钟（阴选法）即可分离细胞。
普通的磁力架可以用于细胞分选吗？
用于细胞分选磁力架的磁场强度要>7000Gs，否则会影响细胞分选效果。
推荐海狸细胞分选磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分选T细胞，样本处理时要活化吗（加刀豆蛋白活化）？
我们未对激活处理后的脾脏或淋巴细胞进行T细胞分选验证。
从理论上讲，阴选方式由于不直接结合目标细胞，通常不受激活处理影响；而阳性选择则可能受到一定影响，尤其是在T细胞激活后某些表面标志物表达发生变化的情况下，可能存在洗脱效率降低的风险。
建议客户在完成细胞分选后再进行激活处理，可以确保分选效果和细胞状态的稳定性。
试剂盒里的biotin antibody mix，有没有封闭Fc受体（FcR）？
没有封闭Fc受体
可以分选出原代细胞吗？
可以，海狸的细胞分选试剂盒，从组织或者其他样本里分选出来的都是原代细胞。
细胞圈门的时候是把所有的细胞都圈入的吗?
圈所有染上色的细胞，（要看染的部位，细胞碎片、死细胞染不上）。
E1左下角细胞碎片不要圈，P1圈对角线（单个核细胞）
散点图在流式上比较分散的原因？
可能是磁吸不充分导致的，可以延长磁吸时间或更换磁性更强的磁力架（＞7000Gs）。
做细胞分选用哪款磁珠？
我们自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做细胞分选，包括阳选和阴选。
目前有客户用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分选，效果也很好。
细胞分选试剂盒中的磁珠洗涤步骤是否可以用磁力架吸附代替离心？
可以，使用磁性吸附洗涤比离心洗涤效果更好。
细胞分选说明书上要求4℃环境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分选buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分选buffer时建议使用0.5 M的液体EDTA。原因：固体的EDTA比较难溶解，溶解后也可能会有肉眼看不到的颗粒，所以要过0.22μm的滤膜，但过滤膜可能会损失掉部分EDTA，所以建议用液体的。
为什么海狸的试剂盒需要裂红后再进行分选？
因为抗体mix中只有少量的红细胞抗体，防止有红细胞残留，所以需要裂红。
阴选和阳选试剂盒中抗体的区别？
阳选中只有一种抗体，即针对目的细胞的抗体；阴选中是抗体mix，含有多种针对非目标细胞的抗体。
阳选与阴选的区别
阳选法：适用样本类型多种、复杂，抗体类型单一，需要解离试剂，直接捕获，细胞没有磁珠标记，有抗体标记，操作时长最快80min，不需要分离柱。
阴选法：适用样本类型相对单一，抗体类型为多种抗体的混合物，不需要解离试剂；间接捕获，不影响细胞性能；细胞没有磁珠标记和抗体标记，操作时长最快25min，不需要分离柱。
分选buffer的配方是什么？海狸可以提供吗？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer。
细胞样品制备时需要几次过筛？具体步骤是什么？
推荐进行2次过筛。
第一次过筛：将样本置于70 μm细胞筛网筛网上进行研磨/冲洗，收集细胞。
第二次过筛：裂红完成后，使用PBS重悬细胞，将细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤。
若只进行1次过筛，残留的细胞团块可能会导致细胞/磁珠聚集，降低分选纯度。
磁珠使用前需要清洗吗？不清洗有什么影响？
磁珠使用前需要用分选buffer清洗2次（清洗方法见说明书）；若不清洗，磁珠保存液中的某些组分（如抑菌剂）可能会影响细胞活性。
抗体和细胞孵育时需要注意什么？
将细胞悬液加到离心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混匀（尽量在底部进行吹打，不要溅到管壁上），4°C孵育 10 min（勿将Ep管插进冰里）。
若孵育时间不足，会使抗体与细胞无法充分结合，从而导致非目标细胞残留，影响分选纯度。
磁吸时需要注意什么？
要使用细胞分选专业磁力架，推荐（Cat. No. 60205/60206），静置5分钟，磁吸后转移大部分悬液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸时间过短可能会导致部分磁珠未完全吸附，分选后的细胞中有磁珠残留，且影响分选纯度。
离心条件是否有统一标准？
常规离心条件为500 g，5分钟（磁珠清洗除外，需10000 g，1分钟）。离心速度过大（超过500g）影响细胞活性。
激活磁珠，每次换液都将细胞冲散的话会不会影响后续结团扩增？结团的细胞是吹散之后的细胞又聚集在一起了还是细胞增殖的团？
吹散不会影响细胞后续扩增，结团的细胞从原理上来说是细胞增殖的团。
加入激活磁珠后发现大部分的细胞还在皿底，这些细胞是不是结合不上磁珠的，是否还能被激活？
这种情况是正常激活现象，背景中散落的细胞在良好激活情况下，细胞形态会变大，与control会出现形态上的区别。正常的小鼠（未进行造模）分选后CD3 T细胞，按照使用说明刺激24-48h，都可以实现CD25CD69>80%的激活响应。
可以通过流式检测CD25CD69（24h、48h，需要同时检测不加磁珠的对照组），对比marker的表达情况做出是否激活的判断。如果想要得到更加迅速、高效的激活响应，可以适当增加磁珠用量，或者在24h-48h之间吹打混匀孔内的细胞和磁珠，帮助细胞和磁珠再次充分接触，但是具体实验效果需要根据实验目的进行调整，并不是激活响应越快、越高就越好。
加入激活磁珠后，镜下观察发现磁珠和细胞没有结合，是什么原因？
刚加入磁珠和细胞下落后，结合没有那么快，可以等24h再观察
CD3/CD28激活磁珠，在传代T细胞的时候需要去除吗?还是可以直接传代?
磁珠去不去除都可以。如果需要去除磁珠，可以在细胞激活后开始聚团扩增的时候去除，一般是在激活后48-72小时，镜下可以看到聚团扩增的T细胞时，通过移液枪轻柔吹打的方式吹散细胞，磁吸去除磁珠。磁珠去除后，在IL-2（或其他常规可以使用的细胞因子）作用下，正常可以扩增7-14天。
哪款磁珠可以用于细胞激活？
如果用于T细胞激活，推荐5μm SA（Cat. No. 22306）和5μm （Cat. No. 70105）羧基磁珠。
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