小鼠CD4+CD25+调节性T细胞分选试剂盒

小鼠 CD4+CD25+ 调节性T细胞（Treg）分选试剂盒专门用于从小鼠脾脏单细胞悬液中高效分选 CD4+CD25+ Treg 细胞。

本试剂盒采用两步分选策略：第一步（富集）：通过免疫磁珠去除非目标细胞，实现 CD4+ T细胞的预富集；第二步（阳性选择）：利用CD25抗体特异性标记目标细胞，并由可解离磁珠（BeaverBeads®）进行捕获，随后通过 Release Buffer将磁珠从细胞表面温和解离。最终获得无磁珠标记的小鼠CD4+CD25+ Treg细胞，可直接应用于下游的分子生物学与细胞生物学实验。

产品特点：

高纯度：分选获得的 Treg 细胞纯度可达 90%。

高活率：分选过程温和，获得的细胞活率大于95%。

无柱分选：无需分离柱，仅使用磁力架即可完成目的细胞分离。

多细胞群体获取：通过初步富集可获得CD4⁺ T细胞；进一步分选后，不仅可获得CD4⁺ CD25⁺ Treg细胞，还可同时收集 CD4⁺ CD25^- T细胞，便于开展后续对照实验或功能研究。

评测数据：

1. 富集后CD4⁺ T细胞纯度检测

使用BeaverBeads® 小鼠Treg 细胞分选试剂盒中CD4 Enrichment Beads组分对小鼠脾脏 CD4⁺ T细胞先进行富集。富集前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）染色后进行流式细胞分析。结果显示，CD4⁺ T细胞脾脏初始占比为15.87%，富集后CD4⁺ T细胞纯度可达90.20%（90.58±1.89%）（图1）。

图1. 流式检测富集前后CD4⁺ T细胞纯度

2. 分选后CD4⁺ CD25⁺ Treg细胞和CD4⁺ CD25^- T纯度检测

使用BeaverBeads® 小鼠Treg 细胞分选试剂盒从富集后的CD4⁺ T细胞分选Treg细胞。分选前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）和 PE 标记的 anti-mouse CD25抗体（克隆号 3C7）进行染色。结果显示，脾细胞中CD4⁺CD25⁺ Treg细胞占比为1.73%（图2左），分选后Treg细胞纯度达93.04%（图2中）；同时可获得CD4⁺CD25^- T细胞，其纯度为90.08%（图2右）。

图2. 流式检测分选前后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞纯度

3. Foxp3表达验证

为进一步验证分选细胞的Treg特性，采用固定/破膜后进行胞内染色，检测关键转录因子FOXP3 的表达。分选前后的细胞用FITC 标记的 anti-mouse CD4 抗体（克隆号 GK1.5）、 PE 标记的 anti-mouse CD25抗体（克隆号 3C7）和Alexa Fluor647标记的anti-mouse Foxp3（克隆号 150D）染色。流式结果显示，分选后CD4⁺细胞占比95.24%，其中CD25⁺ FOXP3⁺ 双阳性细胞占CD4⁺细胞的86.12%, 证明本试剂盒可获得具有典型Treg表型（CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ ）的目标细胞（图3）。

图3. 分选前后CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ Treg 细胞流式染色分析

4.分选前后细胞活率分析

用BeaverBeads® 小鼠Treg细胞分选试剂盒从脾脏分选目的细胞，分选前后细胞经 7-AAD 染色后，使用流式细胞仪检测细胞活率。分选前活细胞比例为95.90%，分选后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的活细胞比例为96.49%，CD4⁺CD25^- T细胞的活细胞比例为96.85%，均保持高活率（图4）。

图4. 流式检测分选前后细胞活率

5.分选后Treg细胞功能分析

为评估分选所得Treg细胞的生物学功能，将分选获得的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞与CD4⁺CD25^- T细胞进行共培养，检测其对效应T细胞增殖的抑制能力。将CD4⁺CD25^- 细胞进行CFSE染色后，使用小鼠CD3/CD28激活磁珠进行刺激，培养3天。72 h后通过流式细胞术检测发现，77.55%的细胞发生增殖。而在加入CD4⁺CD25⁺ Treg细胞（1:2）共培养条件下，增殖比例明显下降至49.55%（图5）。结果表明，本试剂盒分选获得的Treg细胞具有免疫抑制功能，可有效抑制效应T细胞增殖。

图5. 分选后Treg细胞抑制功能检测

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