
Protein A/G抗体纯化试剂盒
¥5400.00
BeaverBeads™ Protein A/G 抗体纯化磁珠系列产品是利用海狸生物纳米表面技术,使Protein A/G高密度定向包被到超顺磁性微球表面。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。本产品为纳米级磁性微球,具有超大比表面积,可大幅度缩短抗体吸附所需的时间,熟练操作可在10min内完成抗体吸附过程,30min内完成抗体纯化流程。抗体纯化磁珠试剂盒配有经过优化的预制缓冲液,为抗体纯化实验提供了最佳的反应条件,提高了抗体纯化实验的稳定性。
- 产品货号:20202-5
- 产品单位:盒
- 产品说明:5 mL, 30mg/mL, 2μm
产品特点
1. 具有高效的抗体结合能力和超低非特异性吸附的性能
![]() | Protein A Matrix磁珠从稀释10倍的人血清中提取抗体IgG的纯度,比直接从血清中提取的IgG纯度基本一致甚至更高。 |
2. 操作省时、简便、温和
下图为BeaverBeads™磁珠应用流程示意图
与层析仪-琼脂糖凝胶纯化操作的对比
![]() | 1.无需离心,可利用磁性分离,与层析仪-琼脂糖凝胶纯化系统极大的缩短操作时间 2.避免反复吸液造成填料损失而带来的误差 3. 避免离心操作中机械剪切力对活性蛋白的损伤 |
3. 产品稳定性高
![]() | BeaverBeads™ Protein A Matrix磁珠稳定性测试。将磁珠置于37℃环境下连续测试8周,其抗体结合效率无明显衰减,表明了该磁珠具有较好的稳定性。 |
4. 抗体洗脱体系更接近中性
本产品采用优化的洗脱缓冲液,可以在pH4.5的条件下洗脱抗体,大大降低了酸性敏感的抗体在低pH值洗脱环境下受到损伤的风险。
5. 极低的Protein A配基脱落率
![]() | BeaverBeads™ 磁珠的抗体纯化产品中Protein A 残留量均低于美国FDA的标准(20 ppm)。与已获FDA认证的国外知名产品无明显差别。 |
6. 可重复利用
BeaverBeads™ 抗体纯化磁珠可重复使用和再生,并保持了较高的抗体结合效率。经过15次不间断的纯化操作后,仍能保持 75% 的lgG结合能力,经过再生处理后,其抗体结合能力可恢复到最初的90%。
磁珠黏壁现象是什么原因?如何解决?
由于疏水性蛋白黏附在磁珠上导致磁珠黏壁。建议缓冲液中加入0.05% tween-20。如果不能改善,不建议继续重复使用。
是否再生后可以用于不同蛋白的纯化?
纯化不同种类的蛋白时,建议使用新的磁珠。
是否可以不再生来重复使用呢?
一般使用3次后需要再生,多次重复使用会降低纯化效率约50%。
IDA-镍和IDA-钴的区别,怎么选择?
IDA-镍的蛋白载量高,40mg/mL Gel,纯度稍低,90%。
IDA-钴的蛋白载量稍低,25mg/mL Gel,纯度95%。
一般客户建议购买IDA-镍磁珠,即可达到目的。
缓冲液中咪唑添加的意义?
结合缓冲液中低浓度的咪唑是为了减少杂蛋白的非特异性吸附;
洗涤缓冲液中低浓度咪唑是为了吸取吸附能力较弱的杂蛋白;
洗脱液中高浓度咪唑是为了洗脱目的蛋白。
磁珠再生后,蛋白纯化效果变差,如何解决?
①再生过程的碱处理可以改善再生磁珠的蛋白纯化效果,参考说明书中磁珠再生部分步骤4。
②重新挂金属离子后为清洗干净,需要增加洗涤步骤。残留的金属离子优先跟蛋白结合,影响蛋白与磁珠的结合。
目标蛋白难洗脱
穿透组分中目标蛋白明显减少,而洗脱组分中目标蛋白很少,取少量磁珠加SDS-PAGE Loadding Buffer于95℃加热5~10min,离心跑电泳,如果发现较多蛋白残留。
(1)洗脱调节太温和。提高洗脱液咪唑浓度至700mM还不能洗脱时,可以尝试降低洗脱液pH至4.0,但低pH会也导致金属离子脱落,磁珠需要再生后再使用。
(2)蛋白吸附在磁珠上无法洗脱。对于非特异性疏水吸附的蛋白,可以增加NaCl浓度至1M,或添加0.1%~2%的Triton X-100。对于聚集沉淀在磁珠上的(尤其注意含有二硫键的蛋白),可以在洗脱缓冲液中加入6M盐酸胍进行变性洗脱。
洗脱产物杂带多,是什么原因?
(1)杂蛋白吸附。由于组氨酸,色氨酸,半胱氨酸等是蛋白质中很常见基团,而蛋白折叠可能导致几个这样的氨基酸残基临近,这样也会使它们和磁珠的作用力增加。可以用不同浓度的咪唑进行梯度洗脱,在样品及平衡缓冲液中添加0.5%吐温或Triton X-100,或5~50%的甘油,可以避免因为疏水相互作用导致非特异吸附,或使用钴离子螯合磁珠(BeaverbeadsTM IDA-Cobalt)。此外,要获得纯度较高的蛋白,需要对裂解、结合缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液的组分、pH、咪唑浓度等进行优化。若还是不能获得高纯度的蛋白,则需要考虑使用多步纯化,结合使用离子交换、凝聚过滤等纯化方法;
(2)菌体破碎条件太剧烈导致蛋白断裂。确保在冰浴条件下破碎;降低超声破碎的强度,缩短时间;适当稀释样品,添加核酸酶,降低样品粘稠度;
(3)蛋白被部分水解:添加合适的蛋白酶抑制剂,并尽可能在低温下操作。
是什么原因导致纯化得到的蛋白量少?
(1)磁珠用量不足。本产品磁珠悬液浓度为10%,对于亲和力较高的蛋白,每毫升磁珠悬液可结合的蛋白量约为3~4mg。用户需要根据目标蛋白含量,使用足够量的磁珠。对于亲和力较低的蛋白,需要增加磁珠用量,延长反应时间,或提高样品及结合缓冲液pH;
(2)蛋白与磁珠亲和力较低。参考问题1;
(3)蛋白浓度低。对样品进行浓缩,或增加磁珠用量、延长反应时间;
(4)磁珠重复使用次数太多。将磁珠进行再生处理(参考产品说明书)。
His-tag蛋白不吸附或亲和力低是什么原因?
首先确认纯化前的样品中是否有目标蛋白。
(1)有目标蛋白,但大量穿透:
a、蛋白不含有标签或未能正确表达。
解决措施:Western Blot鉴定目标蛋白是否有His-Tag。若没有,需要重新构建载体,添加组氨酸标签,并确认标签正确表达。
b、蛋白折叠导致组氨酸标签未完全暴露。
解决措施:
在样品和平衡缓冲缓冲液中加1-2M尿素,这样蛋白结构相对松散,也许能吸附而蛋白不会变性。
在变性条件下纯化蛋白,加入4~8M尿素或4~6M盐酸胍使蛋白变性。
如果蛋白有二硫键,最好加1-2mM DTT或1~5mM巯基乙醇(在样品中添加),可以改善蛋白的吸附。
重新构建载体,将组氨酸标签换到另外一端,或在组氨酸标签基因与目的基因之间增加一段Linker,可以降低蛋白折叠后标签被掩盖的几率。
c、标签太短。
解决措施:将标签的组氨酸数量增加至6-10个。
d、蛋白标签被水解。
解决措施:添加合适的蛋白酶抑制剂;尽量在低温下处理样品;对于分泌表达的蛋白,长时间存放将增加蛋白被降解的风险,应尽快处理样品。
e、蛋白溶解度偏低或聚集。
解决措施:在结合缓冲液中添加0.5%-1% Tween-20、Triton X-100,或5%~50%的甘油,可以增加蛋白的溶解度,减少蛋白聚集。
f、样品及结合缓冲液不合适:解决措施:确认样品及缓冲液中不含有EDTA、还原剂等。另外,将样品及结合缓冲液pH调节至7.4~8.5,有利于蛋白结合。
g、样品及结合缓冲液中咪唑浓度太高:解决措施:降低样品及结合缓冲液中的咪唑浓度。
(2)有目标蛋白,但含量很低:
蛋白表达量低。解决措施:对样品进行浓缩,增加磁珠用量、延长反应时间;优化表达条件(诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间,培养基等);或更换其他合适的表达载体或表达系统。

暂无应用案例